提供樣品時(shí)請(qǐng)注意:
1、菌液
如果提供菌液來(lái)測(cè)序,請(qǐng)?zhí)峁?.5ml以上的新鮮菌液,我們會(huì)為您培養(yǎng)并免費(fèi)抽提質(zhì)粒。 若您的菌株需要培養(yǎng)條件,或?yàn)槭删w,您提供5ml新?lián)u菌液的沉淀菌體,將沉淀菌體裝在離心管中,用封口膜封好后交給我們的工作人員或郵寄給我們。這樣我們可以直接抽提質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序。
2、質(zhì)粒
如果您提供質(zhì)粒來(lái)測(cè)序,請(qǐng)用質(zhì)量較好的試劑盒抽提,以保證質(zhì)粒的純度可以達(dá)到全自動(dòng)熒光測(cè)序的要求。提供質(zhì)粒測(cè)序時(shí),要求:濃度>100ng/微升,體積在10微升以上(對(duì)于每個(gè)樣品只測(cè)一個(gè)反應(yīng)的情況)。如果每個(gè)樣品需測(cè)幾個(gè)反應(yīng),則送樣時(shí)需相應(yīng)提高樣品的量。請(qǐng)將質(zhì)粒溶解在ddH2O中(請(qǐng)勿溶解在TE溶液中)。
注:無(wú)論您提供菌液或質(zhì)粒,請(qǐng)您務(wù)必寫(xiě)明載體的名稱(chēng)、插入片段的大小和位置、選用的測(cè)序引物名稱(chēng)或序列,并且盡可能的標(biāo)明測(cè)序引物距離插入片段的位置(請(qǐng)您注意測(cè)序引物及引物后會(huì)有20-50個(gè)堿基不能準(zhǔn)確讀出)。如果提供特殊測(cè)序引物,請(qǐng)一定寫(xiě)明引物濃度和序列,并且一定要提供高純度的引物,濃度要大于5pmol/ul。
3、PCR產(chǎn)物
如果您提供PCR產(chǎn)物原液來(lái)測(cè)序,請(qǐng)確信PCR產(chǎn)物為單一擴(kuò)增條帶,片段大小在150—2000bp之間,且體積≥50ul,濃度≥50ng/ul。DNA總量必須大于2微克,由我們進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳割膠純化,然后再來(lái)測(cè)序。小于150bp和大于2Kb的DNA片段請(qǐng)克隆后再測(cè)序。
如果您提供已經(jīng)純化后的PCR產(chǎn)物來(lái)測(cè)序,請(qǐng)您進(jìn)行Agarose凝膠電泳純化,然后用質(zhì)量較好的試劑盒回收,將回收的DNA溶解在滅菌過(guò)的去離子水中(請(qǐng)不要溶解在TE中),并確信PCR產(chǎn)物為單一擴(kuò)增條帶。要求:濃度>50ng/微升,提供10微升以上(對(duì)于每個(gè)樣品只測(cè)一個(gè)反應(yīng)的情況)。如果每個(gè)樣品需測(cè)幾個(gè)反應(yīng),則送樣時(shí)需相應(yīng)提高樣品的量。同時(shí)提供PCR引物,準(zhǔn)確標(biāo)明引物濃度,濃度要求大于5pmol/ul,并確信是高純度的引物。
由于PCR產(chǎn)物測(cè)序相對(duì)較難,為得到較好的測(cè)序結(jié)果,送樣時(shí)請(qǐng)盡量滿(mǎn)足上述要求。