蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)產(chǎn)品

常規(guī)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究往往只關(guān)注不同生理、病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，許多重要的生命活動(dòng)、疾病發(fā)生不僅與蛋白質(zhì)的豐度相關(guān)，更重要的是被各類蛋白質(zhì)翻譯后修飾所調(diào)控。因此深入研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾對(duì)揭示生命活動(dòng)的機(jī)理、篩選疾病的臨床標(biāo)志物、鑒定藥物靶點(diǎn)等方面都具有重要意義。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣，質(zhì)譜分析前需要對(duì)修飾進(jìn)行富集以提高其豐度。

技術(shù)原理：

首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物，然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度，然后通過(guò)高質(zhì)量的修飾類抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集，最后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析，通過(guò)相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配，一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn)。

PTM蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)分析

技術(shù)原理：

＞ 蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)分析

樣品經(jīng)酶解后，用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M(jìn)行富集，富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析，并通過(guò)軟件完

成數(shù)據(jù)檢索。

＞ 蛋白質(zhì)泛素化位點(diǎn)分析

樣品經(jīng)酶解后，用基序抗體（K-ε-GG）對(duì)泛素化肽段進(jìn)行富集，富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析，并通過(guò)軟件完成數(shù)據(jù)檢索。

＞ 蛋白質(zhì)乙酰化位點(diǎn)分析

樣品經(jīng)酶解后，用基序抗體對(duì)乙酰化肽段進(jìn)行富集，富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析，并通過(guò)軟件完成數(shù)據(jù)檢索。

＞ 蛋白質(zhì) N- 糖基化位點(diǎn)分析

蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)酶解后利用凝集素（lectin）富集 N- 糖基化肽段，然后用 N- 糖酰胺酶（PNGase）在 H O 中

切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。該處理致使 Asn 分子量增加 2.9890Da。最后用 LC-MS

質(zhì)譜儀檢測(cè)脫糖后的肽段，并通過(guò) MASCOT 軟件檢索數(shù)據(jù)庫(kù)，確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以

及糖基化修飾肽段的序列，從而確定該蛋白質(zhì)的 N- 糖基化位點(diǎn)。

定量磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾，它與信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育以及癌癥機(jī)理等諸多生物學(xué)問(wèn)題有密切關(guān)系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術(shù)和iTRAQ/TMT/Lable free技術(shù)相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的定量研究。

技術(shù)原理

在磷酸化肽段富集前先進(jìn)行 iTRAQ/TMT 標(biāo)記，然后通過(guò) TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段，最后結(jié)合高分辨率質(zhì)譜完成對(duì)樣品的定量分析。

定量N-糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過(guò)程中起關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點(diǎn)具有保守的氨基酸序列NX（S/T）（其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸）

凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用廣泛的分離富集方法。凝集素（lectin）是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì)，能專一識(shí)別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與

之結(jié)合，它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合，糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后，通常用特定的單糖通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來(lái)。蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)酶解后利用lectin 富集 N- 糖基化肽段，然后用 N- 糖酰胺酶（PNGase）在 H218O 中切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。該處理致使 Asn 分子量增加 2.9890Da。最后用 LC-MS 質(zhì)譜儀檢測(cè)脫糖后的肽段，并通過(guò) MASCOT 軟件檢索數(shù)據(jù)庫(kù)，確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列，從而確定該蛋白質(zhì)的 N- 糖基化位點(diǎn)。N- 糖基化位點(diǎn)確定之后，再利用 label-free 的原理對(duì)其進(jìn)行定量分析。

定量泛素化蛋白質(zhì)組學(xué)

泛素化是指泛素分子在一系列特殊的酶作用下，將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分類，從中選出靶蛋白分子，并對(duì)靶蛋白進(jìn)行特異性修飾的過(guò)程。

技術(shù)原理

樣品經(jīng)胰蛋白酶 Trypsin 酶切，酶切產(chǎn)物由泛素化特異性抗體 (Cell Signaling Technology 5562S)進(jìn)行泛素化肽的富集，富集后由質(zhì)譜 Q Excative（Thermo Scientific）分析，分析數(shù)據(jù)由生物信息學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)檢索。

定量乙酰化蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)乙酰化（acetylation）是最常見(jiàn)的酰化修飾類型，是指在乙酰基轉(zhuǎn)移酶的催化下把乙酰基團(tuán)（如乙酰輔酶A等供體）共價(jià)結(jié)合到底物蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基上的過(guò)程。

技術(shù)原理：

樣品經(jīng)胰蛋白酶 Trypsin 酶切，酶切產(chǎn)物由Acetyl-Lysine基序抗體進(jìn)行乙酰化肽段的富集，經(jīng)由高分辨率質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)酰化修飾肽段及位點(diǎn)的鑒定，最后利用 label-free 的原理對(duì)其進(jìn)行定量分析。