Oligo DNA的人工化學(xué)合成始于50年代初期，1980年，全自動(dòng)的固相DNA合成儀面市后，使得快速合成Oligo DNA成為可能，這推動(dòng)了生物工程技術(shù)的蓬勃發(fā)展。隨著生物工程技術(shù)發(fā)展，人工合成Oligo DNA的需求量越來越大，已經(jīng)成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中基礎(chǔ)的試劑之一。而合成Oligo DNA的質(zhì)量，將會直接影響科研人員實(shí)驗(yàn)計(jì)劃的順利進(jìn)行。因此， 使用高質(zhì)量的合成Oligo DNA制品變得尤為重要。
引物合成Oligo DNA制品有如下特點(diǎn)：
1、合成高質(zhì)量的DNA制品。
2、推出脫鹽純化、PAGE純化、HPLC純化三種級別制品，客戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇。我們對每個(gè)制品都進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量管理。
3、制品包裝中附有制品相關(guān)的多種數(shù)據(jù)，包括：合成的原始數(shù)據(jù)，A、G、C、T各堿基的分布情況，分子量，OD數(shù)，nmol數(shù)等，使用方便。
引物合成現(xiàn)在一般都采用亞磷酰胺化學(xué)合成Oligo DNA片段，具有快速偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。該方法是在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成時(shí)從3"→5"方向進(jìn)行，通常3"端的第一個(gè)堿基結(jié)合在Glass擔(dān)體（Controlled Pore Glass，CPG）上。Oligo DNA合成的原理基本相同，主要差別在于合成產(chǎn)率的高低、試劑消耗量和單個(gè)循環(huán)用時(shí)的不同。我公司采用的合成儀主要機(jī)型為ABI3900高通量合成儀。
合成的詳細(xì)過程見圖1，現(xiàn)簡要說明如下：
圖1 Oligo DNA合成原理圖。N1代表第一個(gè)堿基，N2代表第二個(gè)堿基，依次類推。
| 第一步 | 三氯乙酸和預(yù)先連接在固相載體（CPG）上的第一個(gè)核苷酸反應(yīng)（其活性基團(tuán)處于被保護(hù)狀態(tài)），脫去核苷酸5‘-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT，獲得游離的5‘-羥基； |
| 第二步 | 活化新的堿基單體（Phosphoramidite)，準(zhǔn)備與第一個(gè)堿基進(jìn)行反應(yīng)； |
| 第三步 | 合成DNA的原料（亞磷酰胺保護(hù)的核苷酸單體）與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3‘端被活化，5‘-羥基仍然被DMT保護(hù)，與溶液中游離的5‘-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)； |
| 第四步 | 帶帽(capping)反應(yīng)，縮合反應(yīng)中可能有少數(shù)5‘-羥基沒有參加反應(yīng)(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應(yīng)，這種短片段可以在純化時(shí)分離掉； |
| 第五步 | 在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。（即將三價(jià)磷氧化成五價(jià)磷) （重復(fù)進(jìn)行Step1～Step5的循環(huán)，直至合成完所需的Oligo DNA序列） |
| 第六步 | 合成結(jié)束后，將Oligo DNA分子從CPG上切下，再進(jìn)行進(jìn)一步的純化。 |
引物合成過程中可以觀察TCA處理階段的顏色判定合成效率。連接在CPG上的引物被切下來，通過, PAGE等手段純化引物，成品引物用C18濃縮、脫鹽，測定OD260定量，根據(jù)訂單要求分裝。
（一）常規(guī)合成（≤60bp）
片段長度 | 純化方式 | 規(guī)格 | 單價(jià)(元/堿基) | 發(fā)貨周期(工作日) |
15－40bp | OPC | 2-5 OD | ￥1.20 | 2 |
10 OD | ￥1.80 | 2 | ||
30 OD | ￥4.00 | 3 | ||
50 OD | ￥8.00 | 3 | ||
15-60bp | PAGE | 2 OD | ￥1.60 | 3 |
5 OD | ￥1.80 | 3 | ||
10 OD | ￥2.20 | 3 |
（二）長鏈合成（>60bp）
片段長度 | 純化方式 | 規(guī)格 | 單價(jià)(元/堿基) | 發(fā)貨周期(工作日) |
61－80bp | PAGE | 2 OD | ￥4.00 | 3 |
5 OD | ￥6.50 | 3 | ||
10 OD | ￥8.00 | 3 | ||
81-100bp | PAGE | 1 OD | ￥8.00 | 3 |
（三）硫代修飾(SPO3)
產(chǎn)量(OD) | 發(fā)貨時(shí)間(工作日) | 純化方式 | 單價(jià)(￥) |
2 | 4 | PAGE | 8.00/base |
5 | 4 | PAGE | 12.00/base |
10 | 4 | PAGE | 15.00/base |
30以上 | 待詢 | PAGE | 詢價(jià) |
（四）特殊堿基
種類 | 產(chǎn)量（OD) | 發(fā)貨時(shí)間 | 純化方式 | 單價(jià)（元/堿基） |
dＩ | 2 | 4 | PAGE | 80 |
5 | 4 | PAGE | 120 | |
dＵ | 2 | 4 | PAGE | 100 |
5 | 4 | PAGE | 140 | |
5甲基化dＣ | 2 | 4 | PAGE | 300 |
5溴dＵ | 2 | 4 | PAGE | 300 |
（五）修飾/標(biāo)記引物
分類 | 修飾/標(biāo)記 | 純化方式 | 2 OD | 5 OD | 10 OD |
磷酸基團(tuán)(Phosphorylation) | 5" PO4 | HPLC | ￥200.00 | ￥300.00 | ￥400.00 |
3" PO4 | HPLC | ￥300.00 | ￥350.00 | ￥500.00 | |
NH2修飾(Amino Linkers) | 5" or 3" NH2 C3 | HPLC | ￥450.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) |
5" NH2 C6 | HPLC | ￥200.00 | ￥300.00 | ￥450.00 | |
3" NH2 C7 | HPLC | ￥200.00 | ￥300.00 | ￥450.00 | |
5" NH2 C12 | HPLC | ￥450.00 | ￥600.00 | ￥800.00 | |
5" NH2 C6 dT | HPLC | ￥500.00 | ￥700.00 | ￥1,000.00 | |
3" NH2 C6 dT | HPLC | ￥350.00 | ￥500.00 | ￥800.00 | |
SH 修飾 (Thiolation) | 3" SH C3 | HPLC | ￥350.00 | ￥480.00 | ￥600.00 |
5" SH C6 | HPLC | ￥400.00 | ￥500.00 | ￥800.00 | |
Spacers | Spacer C3 | HPLC | ￥280.00 | ￥350.00 | ￥500.00 |
Spacer C6 | HPLC | ￥280.00 | ￥350.00 | ￥500.00 | |
Spacer 9 | HPLC | ￥280.00 | ￥350.00 | ￥500.00 | |
Spacer 18 | HPLC | ￥400.00 | ￥500.00 | ￥800.00 | |
dSpacer | HPLC | ￥500.00 | ￥700.00 | ￥1,000.00 | |
生物素(Biotin) | 5" Biotin | HPLC | ￥300.00 | ￥350.00 | ￥500.00 |
3" Biotin | HPLC | ￥350.00 | ￥400.00 | ￥600.00 | |
5" Biotin TEG | HPLC | ￥700.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
3" Biotin TEG | HPLC | ￥600.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" Dual Biotin | HPLC | ￥1,800.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" or Internal Biotin dT | HPLC | ￥700.00 | ￥900.00 | ￥1,500.00 | |
5" PC Biotin | HPLC | ￥1,800.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
地高辛(Digoxin) | 5" or 3" Digoxin | HPLC | ￥600.00 | ￥800.00 | ￥1,200.00 |
熒光基團(tuán)(Fluorophores) | 5" Cy3 | HPLC | ￥1,200.00 | ￥1,500.00 | ￥2,500.00 |
3" Cy3 | HPLC | ￥1,300.00 | ￥1,600.00 | ￥2,600.00 | |
Internal Cy3 | HPLC | ￥1,400.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" Cy5 | HPLC | ￥1,100.00 | ￥1,500.00 | ￥2,500.00 | |
3" Cy5 | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,800.00 | ￥2,600.00 | |
Internal Cy5 | HPLC | ￥1,400.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" FAM | HPLC | ￥280.00 | ￥320.00 | ￥450.00 | |
3" FAM | HPLC | ￥300.00 | ￥350.00 | ￥500.00 | |
5" HEX | HPLC | ￥450.00 | ￥600.00 | ￥900.00 | |
5" TET | HPLC | ￥450.00 | ￥600.00 | ￥900.00 | |
5" 6-JOE | HPLC | ￥550.00 | ￥650.00 | ￥900.00 | |
3" 6-JOE | HPLC | ￥550.00 | ￥700.00 | ￥1,000.00 | |
5" Rox | HPLC | ￥500.00 | ￥600.00 | ￥900.00 | |
3" Rox | HPLC | ￥550.00 | ￥700.00 | ￥1000.00 | |
5" TAMRA | HPLC | ￥450.00 | ￥600.00 | ￥850.00 | |
3" TAMRA | HPLC | ￥500.00 | ￥650.00 | ￥950.00 | |
5" FITC | HPLC | ￥300.00 | |||
3" FITC | HPLC | ￥350.00 | |||
Internal TAMRA | HPLC | ￥1000.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
淬滅基團(tuán)(Quenchers) | 3" DABCYL | HPLC | ￥750.00 | ￥900.00 | ￥1,200.00 |
3" BHQ 1 | HPLC | ￥600.00 | ￥800.00 | ￥1,100.00 | |
3" BHQ 2 | HPLC | ￥600.00 | ￥800.00 | ￥1,100.00 | |
電化學(xué)標(biāo)記(Electrochemicals) | Ferrocene | HPLC | ￥550.00 | ￥700.00 | ￥1,000.00 |
其它 | 電詢 | ||||
（六）雙標(biāo)記熒光探針
分類 | 標(biāo)記 | 純化方式 | 2 OD | 5 OD | 10 OD |
3" TAMRA | 5" FAM-3" TAMRA | 2次HPLC純化 | ￥1,000.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 |
5" HEX-3" TAMRA | 2次HPLC純化 | ￥1,400.00 | ￥1,600.00 | ￥2,000.00 | |
5" TET-3" TAMRA | 2次HPLC純化 | ￥1,400.00 | ￥1,600.00 | ￥2,000.00 | |
5" JOE-3" TAMRA | 2次HPLC純化 | ￥1,400.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
3" DABCYL | 5" FAM-3" DABCYL | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 |
5" HEX-3" DABCYL | HPLC | ￥1,200.00 | ￥1,400.00 | ￥2,000.00 | |
5" TET-3" DABCYL | HPLC | ￥1,200.00 | ￥1,400.00 | ￥2,000.00 | |
5" JOE-3" DABCYL | HPLC | ￥1,300.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" TAMRA-3" DABCYL | HPLC | ￥1,400.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" Cy5-3" DABCYL | HPLC | ￥1,300.00 | ￥1,600.00 | ￥2,000.00 | |
3" BHQ1 | 5" FAM-3" BHQ1 | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,200.00 | ￥1,450.00 |
5" HEX-3" BHQ1 | HPLC | ￥1,200.00 | ￥1,400.00 | ￥1,800.00 | |
5" JOE-3" BHQ1 | HPLC | ￥1,100.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
BHQ2 | 5" ROX-3" BHQ2 | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,300.00 | ￥1,800.00 |
ECLIPSE | 5" FAM-3" ECLIPSE | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 |
5" HEX-3" ECLIPSE | HPLC | ￥1,000.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" TET-3" ECLIPSE | HPLC | ￥1,200.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" JOE-3" ECLIPSE | HPLC | ￥1,100.00 | 詢價(jià) | 詢價(jià) | |
5" TAMRA-3" ECLIPSE | HPLC | ￥900.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 | |
5" Rox-3" ECLIPSE | HPLC | ￥900.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 | |
其它 | 電詢 | ||||
（七）、簡并堿基及代碼
| 簡并代碼 | M | R | W | S | Y | K | V | H | D | B | N |
| 代表堿基 | A/C | A/G | A/T | C/G | C/T | G/T | A/C/G | A/C/T | A/G/T | C/G/T | A/C/G/T |
* 價(jià)格可能會隨市場有所波動(dòng)，歡迎咨詢當(dāng)?shù)劁N售!
