甲基化BSP介紹:
DNA甲基化是較早發(fā)現(xiàn)的修飾途徑之一,真核生物中甲基化發(fā)生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。大量研究表明,DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達(dá)。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá),去甲基化則誘導(dǎo)了基因重新活化和表達(dá),這種DNA修飾方式在不改變基因序列的前提下實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。BSP(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)克隆測(cè)序法,是目前甲基化檢測(cè)的通用方法。
甲基化BSP實(shí)驗(yàn)原理:
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后再CpG島兩端設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR,將目的產(chǎn)物純化后進(jìn)行TA克隆,每個(gè)克隆挑取陽(yáng)性克隆測(cè)序,最后將測(cè)得的序列與原始序列比對(duì),統(tǒng)計(jì)甲基化位點(diǎn)及數(shù)量,并分析甲基化程度。
基于重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的甲基化分析原理
甲基化服務(wù)特點(diǎn):
1、克服了MSP只能作定性研究,可做定量研究;
2、敏感性高,待測(cè)DNA中5-甲基胞嘧啶分布不均衡也可檢測(cè);
3、只要客戶提供基因名稱或序列,我們免費(fèi)設(shè)計(jì)引物;
4、周期快:2周出結(jié)果。