CUT&Tag技術應用?
應用于表觀遺傳學領域的蛋白質與DNA互作研究
研究轉錄因子在全基因組上的結合或分布位點
研究組蛋白修飾在全基因組上的分布位點
研究轉錄因子下游調控的靶基因
抗體應該如何選擇?
CUT&Tag的數據產出主要取決于樣本量、一抗特異性和一抗的靶點豐度。一抗需要客戶提供商品化的ChIP級別的一抗原液, 項目結束后可寄還剩余一抗。如需公司提供二抗,則限定鼠/兔源的一抗,如無需使用公司二抗,則需要老師提供二抗。
CUT&Tag和ChIP-seq,該如何選擇?
植物以外的物種,無論是組織樣本還是細胞樣本,推薦CUT&Tag ,相對來說CUT&Tag具有更高的成功率和信噪比;植物樣本,推薦ChIP-seq。植物樣本提核困難,不適合CUT&Tag。
CUT&Tag和ChIP-seq有什么區別?
從建庫流程角度,CUT&Tag要求的細胞起始量遠低于ChIP-seq,不需要對樣本進行甲醛交聯,使用beads吸附活細胞的狀態下先進行一抗孵育,后使用Tn5轉座酶切割片段并添加接頭,且無需后續的解交聯步驟。即樣本起始量、樣本狀態、抗體孵育、核酸片段化等步驟原理和ChIP-seq均不相同。從結果上看,CUT&Tag的數據信噪比更好,可重復性更好。
做CUT&Tag實驗的時候,陰性對照和陽性對照怎么設置,作用是什么?
與 ChIP 不同,該實驗方案不需要 input 樣本,但需要添加陰性對照和陽性對照。針對抗體的陽性對照可以采用RNA Pol II/組蛋白,證明系統沒有問題。陰性對照使用與一抗相同種屬的IgG,陽性對照,陰性對照證明抗體特異,實驗結果可信。
客戶有動物組織,建議消化成原代細胞送樣還是將組織凍存送樣?
建議寄送凍存組織。CUT&Tag對細胞的活性要求較高,原代細胞通?;钚云?,凍存復蘇后的細胞活性很難達到送樣要求,建議將新鮮組織清理凍存,及時送樣。
CUT&Tag接收樣本的物種有什么要求?
CUT&Tag適用于哺乳動物細胞的蛋白-DNA互作研究,酵母、植物等細胞需要經過(破除細胞壁或者提取細胞核)來進行實驗。CUT&Tag在哺乳動物細胞系上的應用比較成熟,動物組織經過處理得到懸浮單個細胞同樣可以進行實驗。