提供樣品時請注意:
1、菌液
如果提供菌液來測序,請提供0.5ml以上的新鮮菌液,我們會為您培養并免費抽提質粒。 若您的菌株需要培養條件,或為噬菌體,您提供5ml新搖菌液的沉淀菌體,將沉淀菌體裝在離心管中,用封口膜封好后交給我們的工作人員或郵寄給我們。這樣我們可以直接抽提質粒進行測序。
2、質粒
如果您提供質粒來測序,請用質量較好的試劑盒抽提,以保證質粒的純度可以達到全自動熒光測序的要求。提供質粒測序時,要求:濃度>100ng/微升,體積在10微升以上(對于每個樣品只測一個反應的情況)。如果每個樣品需測幾個反應,則送樣時需相應提高樣品的量。請將質粒溶解在ddH2O中(請勿溶解在TE溶液中)。
注:無論您提供菌液或質粒,請您務必寫明載體的名稱、插入片段的大小和位置、選用的測序引物名稱或序列,并且盡可能的標明測序引物距離插入片段的位置(請您注意測序引物及引物后會有20-50個堿基不能準確讀出)。如果提供特殊測序引物,請一定寫明引物濃度和序列,并且一定要提供高純度的引物,濃度要大于5pmol/ul。
3、PCR產物
如果您提供PCR產物原液來測序,請確信PCR產物為單一擴增條帶,片段大小在150—2000bp之間,且體積≥50ul,濃度≥50ng/ul。DNA總量必須大于2微克,由我們進行瓊脂糖凝膠電泳割膠純化,然后再來測序。小于150bp和大于2Kb的DNA片段請克隆后再測序。
如果您提供已經純化后的PCR產物來測序,請您進行Agarose凝膠電泳純化,然后用質量較好的試劑盒回收,將回收的DNA溶解在滅菌過的去離子水中(請不要溶解在TE中),并確信PCR產物為單一擴增條帶。要求:濃度>50ng/微升,提供10微升以上(對于每個樣品只測一個反應的情況)。如果每個樣品需測幾個反應,則送樣時需相應提高樣品的量。同時提供PCR引物,準確標明引物濃度,濃度要求大于5pmol/ul,并確信是高純度的引物。
由于PCR產物測序相對較難,為得到較好的測序結果,送樣時請盡量滿足上述要求。