2017-06-29
靈芝(Ganoderma atrum )是一種稀少的名貴藥材，具有很高的藥用價值。靈芝多糖(PSG-1)是靈芝的最有效成分之一，因此，也特別受到醫藥科技工作者的重視，對它的研究報道也最多。南昌大學謝明勇教授帶領的團隊多年致力于食品化學和營養學等方面的研究，2017年6月在Journal of Agricultural and Food Chemistry雜志發表了一篇題為Immunomodulatory activity of Ganoderma atrum polysaccharide on purified T lymphocytes through Ca2+/CaN and MAPK pathway based on RNA-seq的文章，文中用PSG-1培養Balb/c小鼠的T淋巴細胞，研究其對免疫調節的影響。
方案設計
以160μg/ml PSG-1和/或5μg/ml ConA培養的Balb/c小鼠T淋巴細胞作為實驗組，以未經 PSG-1處理的Balb/c小鼠T淋巴細胞作為對照組，分別進行細胞因子檢測、細胞增殖實驗、胞內鈣離子濃度測定實驗、CaN活性測定、RNA-seq測序分析及western blot實驗。
實驗結果
1. PSG-1處理對T淋巴細胞免疫調節的影響
結果表明：(1) PSG-1協同 ConA促進T淋巴細胞的增殖；(2) PSG-1協同 ConA顯著促進了細胞因子IL-2、IFN-?和IL-12的分泌；(3) PSG-1處理組Ca2+ 濃度上升，CaN活性增強；(4) PSG-1處理組MAPK活性顯著增強，而抑制劑處理后使得MAPK表達顯著下降。
2. RNA-Seq測序分析
結果表明：(1) PSG-1處理組共產生394個差異表達基因(上調283，下調111)；(2). Ca2+ 通道和免疫調節密切相關（圖1）。
圖1 PSG-1刺激T淋巴細胞后的RNA-Seq和通路分析
3. Ca2+ 通道和MAPK抑制劑對PSG-1處理組T淋巴細胞增殖和細胞因子分泌的影響
結果表明：Ca2+ 通道和MAPK抑制劑顯著抑制了T淋巴細胞增殖和細胞因子的分泌（圖2）。
圖2 PSG-1刺激T淋巴細胞Ca2+ /CaN信號通路
實驗結論
通過RNA-Seq測序分析發現PSG-1通過兩種方式影響Balb/c小鼠T淋巴細胞的免疫調節：1. PSG-1增強Ca2+/CaN/NFAT pathway來促進細胞因子IL-2等的分泌，繼而影響免疫調節；2. PSG-1通過MAPK pathway刺激T淋巴細胞的增殖和細胞因子的分泌從而調節免疫反應。
該研究的高通量測序工作由上海派森諾生物科技股份有限公司完成。
參考文獻
Xiang QD，Yu Q，Wang H, et al. Immunomodulatory activity of Ganoderma atrum polysaccharide on purified T lymphocytes through Ca2+/CaN and MAPK pathway based on RNA-seq[J]. J. Agric. Food Chem, 2017
