2020-07-27
蛋白質（protein）是構成細胞的基本有機大分子，生命活動的主要承擔者。機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。面對五花八門的蛋白檢測產品，你知道選擇什么方法契合你的研究需求嗎？這就為大家帶來常見蛋白產品的分類與介紹，拿走不謝~
一、蛋白組的定量研究
需求：篩選不同實驗組別之間含量差異表達的蛋白質。
定量蛋白組學研究思路可以參考轉錄組，只不過我們的研究目的從看基因表達量變成了基因編碼蛋白的表達量，定量蛋白組學分為標記定量與非標記定量兩種類型。
1、iTRAQ與TMT標記定量蛋白組學
標記定量蛋白組學就是利用多肽體外標記技術，將蛋白酶解后的肽段添加上標簽，可以對一個樣品添加一個標簽，如果樣本數目太多，也可以一個處理組添加相同的標簽。這樣帶有不同標簽的樣品可以被混合上樣檢測，隨著16標的出現，現在就可以同時標記16個樣品，16個樣品混合上樣，由于混合樣品較復雜，所以標記定量實驗過程中會有分級操作。iTRAQ與TMT是不同公司研發的標簽。
iTRAQ：4標、8標，美國應用生物系統公司ABI。
TMT：2標、6標、10、16標，美國Thermo Scientific公司。
2、label-free非標記蛋白組學
顧名思義就是不添加標簽標記的蛋白組學，因為沒有標簽可以區分樣本，所以樣品需要一個一個進液質聯用系統，采用在樣品間穿插QC樣本（質控樣本：所有待測樣品的取等量混合）的方式，看整個實驗過程中儀器的穩定性。
同樣是檢測樣本中整個蛋白組的組間含量差異，那么標記定量與非標定量到底該怎么選呢？請參考：蛋白質組學—標記or非標記，這是一個問題.
二、蛋白質定性研究
需求：所提供樣本（膠條、膠點、溶液）中是否含有感興趣的蛋白或者具體含有哪些蛋白。
采用蛋白質全譜分析（也可稱為質譜shotgun分析）的方法，研究對象是可以是膠點、膠條、或樣本提取物，其目的在于鑒定肽和蛋白質分子是哪些。例如：通過膠圖發現樣本間差異蛋白條帶，可以將膠點切出、鑒定該膠點是哪些蛋白。
三、蛋白修飾組學研究
需求：篩選不同實驗組別之間具有特定修飾基團含量差異表達的蛋白質。
蛋白的化學修飾：凡通過活性基團的引入或去除，而使蛋白組一級結構發生改變的過程。有些情況下，化學結構的改變并不會影響蛋白質的活性，但多數情況下，蛋白質結構的改變會導致蛋白活性及其他方面的變化。基團的引入會引起蛋白分子量的改變，基于此原理可以通過液質聯用檢測不同的蛋白修飾類型。
目前研究較多的蛋白修飾類型有：磷酸化、乙酰化、泛素化、甲基化等。各類修飾的生物學意義，在此不詳細描述了，大家可以查閱資料學習。
四、目標蛋白定量驗證
需求：已通過組學或其他方式篩選出關鍵蛋白，對關鍵蛋白進行定量驗證。
目標蛋白定量分析目前給大家介紹常見的三種
1、PRM（平行反應監視，parallel reaction monitoring）是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監視技術，能夠對目標蛋白質、目標肽段（如發生翻譯后修飾的肽段）進行選擇性檢測，從而實現對目標蛋白質/肽段進行相對或絕對定量。
2、蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot，其基本原理是通過特異性抗體結合目標蛋白，再通過二抗對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行顯色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。
3、ELISA是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked Immune Sorbent Assay) 的簡稱。它是在免疫酶技術的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術 。
以上3種方法的總結：PRM依賴高分辨率質譜，結果更精準，操作更簡單，且可以應用于多種非模式物種。缺點是它需要通過檢測到的特異肽段來區分不同蛋白且定量，受酶切，肽段長短，同源性等因素影響，并不能保證獲得所有目標蛋白的定量信息。WB的方法雖然對于大部分實驗室來說，可以自行實施，但屬于半定量，且依賴高質量的特異性的商業化抗體。Elisa定量常應用于醫學的血清，體液等樣本的檢測。
以上就是常見的蛋白研究方法的介紹，我們還可以提供更多的個性化蛋白實驗與檢測，有蛋白研究的想法記得找小派君哦，我們還有更多的干貨會持續分享給大家~
