2020-06-19
降解組測序是利用高通量測序平臺批量鑒定miRNA真實靶基因的技術,miRNA通常起到抑制或降解mRNA的作用,從而影響基因功能的發揮。
尋找miRNA靶基因的常規手段最常見的有兩類,一類是生信手段:基于序列信息通過Target Scan、miRanda等軟件預測。一個miRNA可以靶向多個mRNA,一個mRNA也可以被多個miRNA靶向結合,所以通過生信預測出來的結果信息量會很龐大,且假陽性高,需要在海量的靶向關系中找到關鍵基因來做實驗驗證。另一類是實驗手段:如利用AGO蛋白做RIP(RNA免疫共沉淀),以及CLIP、生物素下拉等方法。實驗方法一般操作復雜,依賴抗體與試劑的好壞與質量,且人為操作過程中影響因素太多,除了這些外界因素外,還受抗體特異性、交聯效率,背景噪音等因素影響,屬實有點費力不一定討好的樣子。
降解組測序可以同時解決上述手段存在的問題。通量高,結果準,不需要做復雜的實驗。且降解組測序不需要生物學重復,如果同時做轉錄組或者Small RNA測序,每個組的生物學重復混成一份樣品做降解組測序就行啦!
技術流程
miRNA在mRNA上剪切位點t-plot圖
降解組一般都是結合轉錄組以及小RNA測序數據一起闡明基因表達調控機制,早做早發文章哦~