2019-06-19
文案 | 轉錄調控事業部
隨著現代生物學的發展，以組織或細胞群為研究對象，分析多種細胞的平均基因表達水平已經不能滿足科研需求。單細胞轉錄組測序(Single cell RNA sequencing, scRNA-seq)是指在單個細胞水平對其mRNA進行高通量測序的一項新技術，原理是將分離的單個細胞中微量的mRNA通過擴增后再進行高通量測序。單細胞轉錄組測序能夠有效解決組織樣本細胞異質性以及被常規RNA-seq掩蓋的細胞群內的轉錄組異質性難題，有助于發現新的稀有細胞類型，并深入了解細胞生長過程中的表達調控機制。
值此派森諾成立8周年之際，聯合10x Genomics推出單細胞轉錄組整體解決方案。
基于10x Genomics ChromiumTM系統，利用油包水的微反應體系，通過序列標簽（cell barcode和UMI）區別群體中的不同細胞和轉錄本，獲得單細胞水平的基因表達譜，可實現數千甚至上萬個單細胞群體分析，解決常規scRNA-seq方法在通量或擴展性方面存在的不足，為單細胞研究開拓新的思路。
派森諾優勢
01 實驗周期短
派森諾的技術人員，6分鐘內快速完成上萬個細胞封裝，一天內完成80000個細胞的細胞懸液制備、單細胞捕獲、擴增以及建庫整個過程。
02 捕獲效率高
可使單個細胞捕獲效率高達65%，真實再現細胞的RNA表達情況。
03 專業分析快
派森諾的單細胞生信分析團隊，從數據下機只需短短幾天，即可完成全部分析內容，售后服務貼心。
04 項目經驗多
多次成功完成動物細胞、植物細胞的單細胞測序；強勢推動腫瘤細胞異質性、免疫細胞群體檢測以及胚胎發育等研究。
技術原理
10x Genomics儀器小巧，但功能強大，具有通量高、靈活性強、流程簡單、技術性能高、單個細胞制備成本低等優勢，其技術核心是油滴包裹的凝膠珠(GEM)，該系統有75萬種barcoded beads，每個bead上有40-80萬探針。
利用8通道的微流體“雙十字”交叉系統，將含barcode的凝膠珠（Gel Beads）、細胞和酶的混合物、油三者混合，形成GEMs。
GEMs形成后，細胞裂解，凝膠珠自動溶解釋放大量barcode序列，隨后mRNA逆轉錄產生帶有Barcode和UMI信息的cDNA，再構建標準測序文庫。
建庫流程
油滴破碎，cDNA為模板進行PCR擴增，然后進行cDNA打斷、加測序接頭P5及測序引物R1等傳統二代測序的建庫過程單細胞轉錄組測序
10x Genomics單細胞轉錄組測序分析內容展示
01 分析流程
02 聚類分析
03 差異分析和富集結果
10x Genomics單細胞轉錄組測序樣品要求
派森諾提供攜帶10x Genomics一起上門建庫服務，由于10x Genomics對樣本要求較高，各位師生可以提前樣品檢測：
樣品總量：細胞懸浮液，一個樣本細胞起始量約 5x105個；
樣品濃度：7x105—1.2x106/ml；
細胞活性：活細胞數在 80% 以上；
細胞大小：小于 40 μm；
細胞培養基及緩沖液不能含有 Ca2+ 和 Mg2+ 等影響酶活性的物質；組織一般需要新鮮標本，不可冷凍，植物細胞需制成原生質體。
小貼士
1.樣品來源可以是動物、植物等，組織和細胞都需要優化方案確保細胞解離成單細胞；
2.建議的洗滌方案是用含有0.04% BSA的1X PBS來沉淀和重懸細胞兩次；
3.建議使用寬槍頭重懸。 ?
派森諾成立8周年，初心不變，始終以嚴謹的科學態度，成熟的測序技術，貼心的產品服務，和廣大師生共同探索科研之路。
