我尋著你的足跡---熒光定量PCR技術(shù)
2016-09-18
熒光定量PCR技術(shù)是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR反應(yīng)過(guò)程。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一次熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，結(jié)合相應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，可以得到熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)，計(jì)算待測(cè)樣品初始模版的量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍，運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)，可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行相對(duì)定量、絕對(duì)定量和定性分析。它提高了普通PCR技術(shù)的特異性和準(zhǔn)確性，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、臨床檢驗(yàn)、海關(guān)商貿(mào)檢疫等各個(gè)領(lǐng)域。
1．相對(duì)定量
包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增，采用SYBR Green I法和TaqMan探針?lè)▋煞N方式，一般采用2-△△CT法進(jìn)行計(jì)算，每個(gè)樣本包含三次技術(shù)重復(fù)。
項(xiàng)目結(jié)題后提供完整詳細(xì)的的結(jié)題報(bào)告，包括技術(shù)路線(xiàn)、實(shí)驗(yàn)具體操作、擴(kuò)增曲線(xiàn)、融解曲線(xiàn)和具體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析及完善的后期技術(shù)支持。
結(jié)果示例
擴(kuò)增曲線(xiàn) 融解曲線(xiàn)
表達(dá)定量（2-△△CT）
2．絕對(duì)定量
需要制備標(biāo)準(zhǔn)品并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，然后檢測(cè)目的樣本中的基因，比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到基因準(zhǔn)確拷貝數(shù)。
項(xiàng)目結(jié)題后提供完整詳細(xì)的結(jié)題報(bào)告，包括技術(shù)路線(xiàn)、實(shí)驗(yàn)具體操作、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、擴(kuò)增曲線(xiàn)和具體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析及完善的后期技術(shù)支持。
結(jié)果示例
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
擴(kuò)增曲線(xiàn)
3、我們的優(yōu)勢(shì)
①專(zhuān)業(yè)平臺(tái)
RAININ電動(dòng)移液器，準(zhǔn)確、穩(wěn)定移液；
使用定量PCR儀中常用的ABI StepOne Plus，穩(wěn)定性好；
核心試劑采用美國(guó)原裝進(jìn)口KAPA試劑，優(yōu)異的信號(hào)和反應(yīng)效率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。
②豐富的qPCR經(jīng)驗(yàn)
基因類(lèi)別有DNA、mRNA、miRNA；物種類(lèi)別有人、鼠、雞、藍(lán)藻、酵母菌、反硝化菌、線(xiàn)蟲(chóng)、蘋(píng)果、核桃等等。
③周期短
一周出結(jié)果
4、需客戶(hù)提供
詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)要求，數(shù)據(jù)分析要求，基因名稱(chēng)（提供Genbank登錄號(hào)），待測(cè)樣本（清晰樣品編號(hào)），保證樣本質(zhì)量。
