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高通量qPCR芯片推出極速周期——基因豐度唾手可得!

2024-07-01

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高通量qPCR芯片極速周期

只需15個工作日!

即可完成一張芯片5184個納升級qPCR反應!



產品介紹

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實時熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR)是20世紀90年代發展起來的一種準確、快速的核酸定量分析技術,通過在PCR反應體系中引入一種熒光化學物質,對PCR擴增反應中每一個循環產物的熒光信號進行實時檢測,得到一條熒光擴增曲線圖,以此實驗對初始模板的定量分析。

高通量qPCR技術是對傳統qPCR技術的一次突破性升級。高通量qPCR技術將針對目的基因設計的對應qPCR引物包裝至薄層金屬合金納米孔芯片得到高通量qPCR芯片,通過SmartChip超高通量熒光定量PCR系統完成。該系統每次能夠并行5184個納升級qPCR反應,可對多個樣本進行高通量、高效性、高精確性和高靈敏度的目的基因檢測和定量,規避了傳統qPCR方法的基因檢測單一、費用成本高和效率低等缺點。



絕對定量芯片——針對微生物群體樣本

絕對定量芯片主要針對微生物群體樣本,包括抗生素抗性基因芯片、重金屬抗性基因芯片、微生物功能基因芯片等。針對群體樣本中的細菌與古菌,以16S rRNA作為內參,使用SmartChip超高通量熒光定量PCR系統,可以快速對大批量樣本的特定研究方向的相關基因進行高效準確的基因定量。

相對豐度計算

以16S rRNA作為內參,參照以下公式進行數據計算:

(1) 相對拷貝數=10^(31-Ct)/(10/3)

(2) 基因相對豐度=基因相對拷貝數/16S rRNA相對拷貝數

(3) 對Ct值數據進行標準化,得到各基因在各樣本中的相對豐度信息。

絕對豐度計算

使用16S 擴增的PCR產物構建標準質粒。使用Roche儀器進行qPCR檢測,制作標準曲線。代入各樣品對應的16S rRNA Ct值數據,對各樣品的16s rRNA基因進行絕對定量。通過公式:16SrRNA相對豐度/16S rRNA絕對定量=基因相對豐度/基因絕對定量,換算即可獲得其他基因的絕對定量信息。

實驗流程

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生信分析流程

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生信分析流程

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相對定量芯片——定量差異表達基因

相對定量芯片主要定量不同個體樣本中的差異表達基因。選擇合適的內參基因,使用SmartChip超高通量熒光定量PCR系統,可以快速對大批量樣本的大量基因進行高效準確的相對定量。

采用 2-△△Ct 分析方法,比較基因的差異表達水平 

(1)內參基因均一化樣本差異 

△Ct=Ct 目的基因-Ct 內參基因 

(2)其他樣本和對照本比較 

△△Ct=△Ct 實驗組-△Ct 對照組。

(3)基因差異表達水平計算

使用2-△△Ct 公式計算基因表達水平差異


實驗流程

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由于做相對定量芯片的引物和樣本種類較復雜,我們一般在引物合成后,使用常規qPCR儀器將隨機部分樣本混樣進行預實驗,確認引物的特異性與CT值,并確定上機程序。預實驗正常后,進行芯片上機。相對定量芯片的數據為不同樣本基因相對于對照組的表達量差異倍數,后續可根據需求制作相對定量熱圖、柱狀圖等。

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通過高通量qPCR系統,不論是群體樣本絕對定量,還是個體樣本相對定量,都可以在短時間內對大批量樣本的大量基因進行高效準確的定量!

高通量qPCR芯片急速周期,只需15個工作日,即可完成一張芯片5184個納升級qPCR反應!更短的周期!更低的成本!更完美的體驗!基因豐度唾手可得!

心動不如行動,趕快行動起來吧!


基因工程產品目錄


基因定量服務

高通量qPCR芯片、常規相對定量(mRNA,microRNA,lncRNA,circRNA,外泌體定量等)、常規絕對定量(微生物多樣性、功能基因)

SNP分型服務

Kasp法、Sanger測序法、SNaPshot法

PCR重測序服務

物種鑒定、目的基因擴增測序、PCR產物測序

基礎分子生物學服務

引物合成、標記探針引物合成、一代測序、PCR擴增

表觀遺傳研究

甲基化BSP檢測

毛細管電泳分型服務

SSR引物開發、微衛星多態性分析、MSI檢測、STR跑板、細胞系鑒定

分子克隆服務

全基因合成、PCR克隆、TA克隆、定點突變、RNA合成

蛋白互作驗證服務

核體系酵母單雜/雙雜、膜體系酵母雙雜、點對點驗證

蛋白測定服務

酶聯免疫吸附(Elisa)


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