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PacBio Sequel

技術(shù)特點(diǎn)

測序讀長可達(dá)到8-12kb;完成一輪測序反應(yīng)可產(chǎn)生160G數(shù)據(jù);測序系統(tǒng)包含16個(gè)SMRT cell測序模塊,每個(gè)SMRT cell可產(chǎn)生5-10G數(shù)據(jù);每個(gè)SMRT cell包含100萬個(gè)零模波導(dǎo)孔,每個(gè)零模波導(dǎo)孔為一個(gè)測序單元,完成一條DNA分子的測序反應(yīng)。



應(yīng)用領(lǐng)域

1. 全基因組de novo測序

與二代測序不超過1Kb的讀長相比,PacBio Sequel的長讀長將很好地解決短序列數(shù)據(jù)的拼接難題。同時(shí),與二代測序的模板樣品需要擴(kuò)增相比,PacBio Sequel無需擴(kuò)增可直接對單個(gè)分子進(jìn)行測序,很好地避免了PCR擴(kuò)增偏好性和GC偏好性,PacBio Sequel可輕松 跨越GC含量異常(過高或過低)及高度序列重復(fù)的區(qū)域,實(shí)現(xiàn)序列覆蓋的完整性和均一性。


2. 基因組草圖的優(yōu)化或基因組完成圖繪制

對前期已開展測序的動(dòng)植物、微生物等基因組結(jié)合三代長讀長測序數(shù)據(jù)進(jìn)行完善和提升。針對前期已經(jīng)開展全基因組測序,獲得基因組草圖的動(dòng)植物、微生物等,可以結(jié)合PacBio Sequel平臺(tái)長讀長reads進(jìn)行補(bǔ)充,從而快速獲得前期沒有測得的信息及提升基因組的完整度。另外還可以針對前期沒有檢測獲得的結(jié)構(gòu)變異信息(structural-variation events)、串聯(lián)重復(fù)序列信息(tandem duplication)、易位信息(Inversion)等。尤其在微生物基因組完成圖的繪制中,可在一天之內(nèi)將基因組完善獲得0 gap contig。


3. 全長轉(zhuǎn)錄本測序

PacBio Sequel  的長讀長可實(shí)現(xiàn)全長轉(zhuǎn)錄本測序,并使基因可變剪接形式的識(shí)別成為可能,因此可以對新基因及其isoform進(jìn)行更好的研究。同時(shí),長讀長不再需要對RNA-Seq的reads進(jìn)行組裝,因此可以更完整的對基因模型和轉(zhuǎn)錄的基因進(jìn)行更好的注釋,用以改進(jìn)參考基因組中的基因注釋信息。


4.  宏基因組測序

長讀長reads能夠鑒定水體、土壤、腸道等生境中微生物的種類的鑒定,能夠更加快捷地獲得更多微生物物種的全基因組序列。


5. 16S rDNA全長測序

PacBio Sequel的平均讀長為8-12Kb,而16S rDNA長度大約為1540bp,因此結(jié)合該平臺(tái)測序可以成功測序獲得16S的全長序列。


6. 細(xì)胞器基因組測序

葉綠體基因組和線粒體基因組序列都包含重復(fù)序列、反向重復(fù)序列等復(fù)雜結(jié)構(gòu),PacBio Sequel的長讀長可直接跨越這些區(qū)域獲得這些細(xì)胞器的全基因組序列信息等,基因組組裝不依賴于是否有近緣物種的線粒體和葉綠體基因組信息等,重測序能夠檢測到更多的SNPs 及inde信息。


7. 全基因組重測序&稀有變異鑒定

PacBio RS II  長讀長測序reads無GC偏好,能夠更好地獲得基因組的遺傳變異,包括SNPs的鑒定到CNV、SV結(jié)構(gòu)變異等,可運(yùn)用至人類癌癥基因組重測序等。PacBio Sequel平臺(tái)10小時(shí)即可完成測序,可應(yīng)用至需要快速反饋的臨床檢測中,如細(xì)菌感染疾病中細(xì)菌的鑒定、病毒的鑒定等,取樣開展重測序和目前已有的細(xì)菌、病毒基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對鑒定即可。


8. 表觀遺傳學(xué)

PacBio Sequel利用測序過程聚合酶反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)變化,實(shí)現(xiàn)對堿基修飾進(jìn)行直接測序。當(dāng)堿基有額外修飾時(shí),DNA聚合酶的合成速度會(huì)減慢,對應(yīng)的信號(hào)會(huì)被檢測出來。每種堿基修飾事件都會(huì)使聚合酶的“停頓模式”PacBio Sequel產(chǎn)生微小差異,最終反映到熒光脈沖信號(hào)的間隔上。除了甲基化修飾,還可以檢測5-hC、5-hmU、5-hU、1-mA、6-mA、8-oxoA、BPDE、6-mT、6-mG等堿基修飾,甚至可以鑒別傳統(tǒng)亞硫酸氫鹽測序法無法區(qū)分的甲基化修飾和羥甲基化修飾。PacBio Sequel平臺(tái)可以在測序的同時(shí)即可檢測表觀遺傳學(xué)修飾信息,只需對測序數(shù)據(jù)選擇合適的軟件即可分析堿基修飾信息。


* 以上產(chǎn)品介紹及數(shù)據(jù)來源于PacBio官方,僅供參考,以PacBio官方為準(zhǔn)。

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