全基因合成簡介

在我們的實(shí)驗(yàn)工作中，如果采用一般實(shí)驗(yàn)手段無法得到目的基因時(shí)，可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室人工合成。公司擁有成熟的基因合成技術(shù)，可根據(jù)客戶要求，以具競爭力的價(jià)格和快捷的交貨周期提供全基因合成服務(wù)及相關(guān)服務(wù)。合成的基因可以根據(jù)客戶的需求連接到不同的載體上，最終提供的產(chǎn)品包括合成報(bào)告、測序報(bào)告、質(zhì)粒酶切圖譜、凍干質(zhì)粒以及含有該質(zhì)粒的菌株。 

 一、應(yīng)用領(lǐng)域：

1. 基因突變 / 重組 / 高效表達(dá)。

2. 其他方法難獲得的 cDNA。

3. 合成不同的基因變異或新基因。

4. 用于微芯片的大量 cDNA 。

二、服務(wù)特色： 

1. 免費(fèi)提供基因的參考設(shè)計(jì)方案，包括設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)，密碼子優(yōu)化等。

2. 基因合成周期短，嚴(yán)格按照與用戶簽定的基因合成服務(wù)協(xié)議和保密合同執(zhí)行。

3. 能合成長度達(dá) 10 kb 的基因。

4. 基因克隆到用戶指定或提供的表達(dá)載體上。

三、服務(wù)流程： 

1. 收到客戶提供序列后，確定使用何種酶切位點(diǎn)克隆，克隆到何種載體等等，然后對全序列進(jìn)行編輯，傳至客戶確認(rèn)。

2. 經(jīng)分析確認(rèn)達(dá)成一致意見后，簽訂基因合成服務(wù)協(xié)議與保密合同。基因合成服務(wù)協(xié)議簽定后，客戶需預(yù)付50% 的合成費(fèi)用，本公司方開始合成。交貨期也從即日開始。

3. 設(shè)計(jì)Oligo合成方案，在全自動(dòng)合成儀器上進(jìn)行單鏈的化學(xué)合成。

4. 通過OVER-LAP的PCR，把單鏈Oligo拼接成雙鏈的全長基因。

5. 將PCR產(chǎn)物酶切、純化，連接到質(zhì)粒中，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞株培養(yǎng)。

6. 提取陽性克隆進(jìn)行DNA測序，確認(rèn)插入片段的準(zhǔn)確性。

7. 對可能存在的錯(cuò)誤位點(diǎn)用定點(diǎn)突變的方法加以改正，再經(jīng)測序驗(yàn)證。

8. 提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括裝載目的基因的質(zhì)粒、細(xì)菌株、測序圖譜 / 序列。

9. 合成完畢后，本公司通知客戶，收到全部貨款，本公司開始發(fā)貨 。

四、情況說明 

1. 由于基因結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，對于較長的片段或一些復(fù)雜結(jié)構(gòu)如重復(fù)序列、高 GC 片段等，可能會(huì)需要額外的時(shí)間調(diào)整合成方案。如果發(fā)生這種情況，技術(shù)人員會(huì)及時(shí)與您聯(lián)系，告知您合成進(jìn)程。

2. 所合成的基因一般克隆于通用載體中，如需克隆在客戶指定的載體中，我公司會(huì)酌情再收取一定的費(fèi)用，并且交貨時(shí)間會(huì)適當(dāng)延長。

五、密碼子優(yōu)化：

　　對于密碼子優(yōu)化服務(wù)，在提供需要優(yōu)化和合成的基因序列的同時(shí)，我們還需要如下訊息：

1. 需要合成的蛋白或 DNA 序列。

2. 宿主表達(dá)系統(tǒng)。

3. 兩端的限制性酶切位點(diǎn)。

4. 優(yōu)化后的序列中需要避免的限制性酶切位點(diǎn)。

5. 優(yōu)化后的序列中需要保留的限制性酶切位點(diǎn)。

六、合成完成后向客戶提供的技術(shù)資料與產(chǎn)品 

1. 不少于2ug的含目的基因的通用載體質(zhì)粒一份。

2. 含上述質(zhì)粒的大腸桿菌菌株一份。

3. 基因序列的原始報(bào)告測序正本一份。

4. 基因合成報(bào)告一份。

七、全基因合成服務(wù)要求 

1.  請將您需要合成的基因全序列以 E-mail 或傳真的形式告知公司的業(yè)務(wù)員或公司的技術(shù)員。

2.  請說明實(shí)驗(yàn)的具體要求，如：使用何種酶切位點(diǎn)進(jìn)行克隆以及需克隆于何種載體等。

3.  測序結(jié)果如果發(fā)現(xiàn)有錯(cuò)誤位點(diǎn)，我們會(huì)采取相應(yīng)的技術(shù)手段進(jìn)行修復(fù)校對。

4.  提供實(shí)驗(yàn)結(jié)果：包括實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程、測序結(jié)果、測序彩色峰圖、含有合成基因的質(zhì)粒及含該質(zhì)粒的菌體( 穿刺菌 )等。

定點(diǎn)突變

通過實(shí)驗(yàn)方法可以向目的基因片段中引入所需的 DNA 變異，包括堿基添加、刪除、點(diǎn)突變等。

（一）服務(wù)要求

1. 請您通過業(yè)務(wù)員或技術(shù)員提供需要進(jìn)行突變基因的詳細(xì)序列；突變前序列請標(biāo)注為： Wild sequence ；突變后序列請標(biāo)注為： Mut sequence 。
2. 請?zhí)峁┩蛔兓蚩寺〔僮鞯脑敿?xì)背景資料，例如使用何種限制酶酶切位點(diǎn)、克隆于何種載體等。
3. 請說明實(shí)驗(yàn)的具體要求，詳細(xì)情況請參考如下：

客戶常問的幾個(gè)問題：

1.如果想在貴公司做與基因工程相關(guān)的技術(shù)服務(wù)，該如何聯(lián)系?

可以直接通過業(yè)務(wù)員或公司的技術(shù)部聯(lián)系；同時(shí)提供詳細(xì)的背景資料、實(shí)驗(yàn)要求等。技術(shù)人員經(jīng)過研討后將與您聯(lián)系，共同制定實(shí)驗(yàn)方案，并告知您具體的服務(wù)價(jià)格和完成時(shí)間；我們將在收到您同意實(shí)驗(yàn)的文字資料與實(shí)驗(yàn)材料后立即開始實(shí)驗(yàn)。

2.貴公司對我們提供的實(shí)驗(yàn)材料有何具體要求?

（1） 對實(shí)驗(yàn)材料中涉及病原體等危險(xiǎn)的材料拒絕接受。
（2） 在實(shí)驗(yàn)材料中涉及到的堿基序列須以電子版的形式提供. 
（3）實(shí)驗(yàn)中使用的載體等要盡量提供詳細(xì)的背景資料（如質(zhì)粒大小、抗性、拷貝數(shù)、多克隆位點(diǎn)等 ） ；如 果為商品化載體，請?zhí)峁┥a(chǎn)廠家及標(biāo)準(zhǔn)名稱；如果所提供載體是您自己構(gòu)建的，請注明大體結(jié)構(gòu)情況。
（4）實(shí)驗(yàn)中如果使用氨芐青霉素、氯霉素、鏈霉素、卡那霉素以外的抗生素時(shí)，抗生素需您自己提供。
（5）您自己提供的引物如果為干品，請標(biāo)明具體的 OD 數(shù)；如果為液體狀態(tài)，請標(biāo)明具體濃度。

3.公司能免費(fèi)提供哪些載體和引物?

公司免費(fèi)提供測序及 PCR 擴(kuò)增用的通用引物： Bca BEST Primer M13(-47) 、 Bca BEST Primer RV-M 、 T3 Promoter 、 T7 Promoter 、 AOX 3" 、 AOX 5" 、 pGEX 3" 、 pGEX 5" 以及 SP6 Promoter 等。

4. 基因工程操作服務(wù)通常耗時(shí)較長，如果想了解實(shí)驗(yàn)進(jìn)展情況該怎么辦?

公司在每周五以 E-mail 的形式將實(shí)驗(yàn)進(jìn)展的大體情況通知客戶；您也可以向業(yè)務(wù)員查詢；也可以直接與技術(shù)人員交流溝通。

（二）操作程序

1. 具體聯(lián)系方式請參考“ 客戶常問的幾個(gè)問題 ”。
2. 如您提供的模板序列為非公司的測序結(jié)果，我們將首先對模板進(jìn)行測序并將與您溝通測序結(jié)果。
3. 根據(jù)突變方案設(shè)計(jì)合成突變引物，進(jìn)行基因突變實(shí)驗(yàn)的 PCR 反應(yīng)，克隆變異體。
4. 進(jìn)行 DNA 測序驗(yàn)證突變序列的正確性。
5. 提供實(shí)驗(yàn)結(jié)果，包括實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程、突變用引物、質(zhì)粒變異體以及含有該質(zhì)粒的菌種（穿刺菌）、測序結(jié)果、測序彩色峰圖等。
6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通載體上的單點(diǎn)突變的時(shí)間約需 10 天左右。

（三）收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

* 價(jià)格可能會(huì)隨市場有所波動(dòng)，歡迎咨詢當(dāng)?shù)劁N售!