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科研服務(wù)

引物合成

什么是引物合成?

Oligo DNA的人工化學(xué)合成始于50年代初期,1980年,全自動(dòng)的固相DNA合成儀面市后,使得快速合成Oligo DNA成為可能,這推動(dòng)了生物工程技術(shù)的蓬勃發(fā)展。隨著生物工程技術(shù)發(fā)展,人工合成Oligo DNA的需求量越來越大,已經(jīng)成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中基礎(chǔ)的試劑之一。而合成Oligo DNA的質(zhì)量,將會直接影響科研人員實(shí)驗(yàn)計(jì)劃的順利進(jìn)行。因此, 使用高質(zhì)量的合成Oligo DNA制品變得尤為重要。


引物合成Oligo DNA制品有如下特點(diǎn):

1、合成高質(zhì)量的DNA制品。

2、推出脫鹽純化、PAGE純化、HPLC純化三種級別制品,客戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇。我們對每個(gè)制品都進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量管理。

3、制品包裝中附有制品相關(guān)的多種數(shù)據(jù),包括:合成的原始數(shù)據(jù),A、G、C、T各堿基的分布情況,分子量,OD數(shù),nmol數(shù)等,使用方便。



引物合成的原理

引物合成現(xiàn)在一般都采用亞磷酰胺化學(xué)合成Oligo DNA片段,具有快速偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。該方法是在固相載體上完成DNA鏈的合成的,合成時(shí)從3"→5"方向進(jìn)行,通常3"端的第一個(gè)堿基結(jié)合在Glass擔(dān)體(Controlled Pore Glass,CPG)上。Oligo DNA合成的原理基本相同,主要差別在于合成產(chǎn)率的高低、試劑消耗量和單個(gè)循環(huán)用時(shí)的不同。我公司采用的合成儀主要機(jī)型為ABI3900高通量合成儀。

合成的詳細(xì)過程見圖1,現(xiàn)簡要說明如下:



圖1 Oligo DNA合成原理圖。N1代表第一個(gè)堿基,N2代表第二個(gè)堿基,依次類推。



第一步三氯乙酸和預(yù)先連接在固相載體(CPG)上的第一個(gè)核苷酸反應(yīng)(其活性基團(tuán)處于被保護(hù)狀態(tài)),脫去核苷酸5‘-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT,獲得游離的5‘-羥基;
第二步活化新的堿基單體(Phosphoramidite),準(zhǔn)備與第一個(gè)堿基進(jìn)行反應(yīng);
第三步合成DNA的原料(亞磷酰胺保護(hù)的核苷酸單體)與活化劑四氮唑混合,得到核苷亞磷酸活化中間體,它的3‘端被活化,5‘-羥基仍然被DMT保護(hù),與溶液中游離的5‘-羥基發(fā)生縮合反應(yīng);
第四步帶帽(capping)反應(yīng),縮合反應(yīng)中可能有少數(shù)5‘-羥基沒有參加反應(yīng)(少于2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應(yīng),這種短片段可以在純化時(shí)分離掉;
第五步在氧化劑碘的作用下,亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。(即將三價(jià)磷氧化成五價(jià)磷) (重復(fù)進(jìn)行Step1~Step5的循環(huán),直至合成完所需的Oligo DNA序列)
第六步合成結(jié)束后,將Oligo DNA分子從CPG上切下,再進(jìn)行進(jìn)一步的純化。


引物合成過程中可以觀察TCA處理階段的顏色判定合成效率。連接在CPG上的引物被切下來,通過, PAGE等手段純化引物,成品引物用C18濃縮、脫鹽,測定OD260定量,根據(jù)訂單要求分裝。


引物合成項(xiàng)目表


(一)常規(guī)合成(≤60bp)

片段長度

純化方式

規(guī)格

單價(jià)(/堿基)

發(fā)貨周期(工作日)

1540bp

OPC

2-5 OD

¥1.20

2

10 OD

¥1.80

2

30 OD

¥4.00

3

50 OD

¥8.00

3

15-60bp

PAGE

2 OD

¥1.60

3

5 OD

¥1.80

3

10 OD

¥2.20

3


(二)長鏈合成(>60bp)

片段長度

純化方式

規(guī)格

單價(jià)(/堿基)

發(fā)貨周期(工作日)

6180bp

PAGE

2 OD

¥4.00

3

5 OD

¥6.50

3

10 OD

¥8.00

3

81-100bp

PAGE

1 OD

¥8.00

3


(三)硫代修飾(SPO3)

產(chǎn)量(OD)

發(fā)貨時(shí)間(工作日)

純化方式

單價(jià)(¥)

2

4

PAGE

8.00/base

5

4

PAGE

12.00/base

10

4

PAGE

15.00/base

30以上

待詢

PAGE

詢價(jià)


(四)特殊堿基

種類

產(chǎn)量(OD)

發(fā)貨時(shí)間

純化方式

單價(jià)(元/堿基)

dI

2

4

PAGE

80

5

4

PAGE

120

dU

2

4

PAGE

100

5

4

PAGE

140

5甲基化dC

2

4

PAGE

300

5溴dU

2

4

PAGE

300


(五)修飾/標(biāo)記引物

分類

修飾/標(biāo)記

純化方式

2 OD

5 OD

10 OD

磷酸基團(tuán)(Phosphorylation)

5" PO4

HPLC

¥200.00

¥300.00

¥400.00

3" PO4

HPLC

¥300.00

¥350.00

¥500.00

NH2修飾(Amino Linkers)

5" or 3" NH2 C3

HPLC

¥450.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" NH2 C6

HPLC

¥200.00

¥300.00

¥450.00

3" NH2 C7

HPLC

¥200.00

¥300.00

¥450.00

5" NH2 C12

HPLC

¥450.00

¥600.00

¥800.00

5" NH2 C6 dT

HPLC

¥500.00

¥700.00

¥1,000.00

3" NH2 C6 dT

HPLC

¥350.00

¥500.00

¥800.00

SH 修飾 (Thiolation)

3" SH C3

HPLC

¥350.00

¥480.00

¥600.00

5" SH C6

HPLC

¥400.00

¥500.00

¥800.00

Spacers

Spacer C3

HPLC

¥280.00

¥350.00

¥500.00

Spacer C6

HPLC

¥280.00

¥350.00

¥500.00

Spacer 9

HPLC

¥280.00

¥350.00

¥500.00

Spacer 18

HPLC

¥400.00

¥500.00

¥800.00

dSpacer

HPLC

¥500.00

¥700.00

¥1,000.00

生物素(Biotin)

5" Biotin

HPLC

¥300.00

¥350.00

¥500.00

3" Biotin

HPLC

¥350.00

¥400.00

¥600.00

5" Biotin TEG

HPLC

¥700.00

詢價(jià)

詢價(jià)

3" Biotin TEG

HPLC

¥600.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" Dual Biotin

HPLC

¥1,800.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" or Internal Biotin dT

HPLC

¥700.00

¥900.00

¥1,500.00

5" PC Biotin

HPLC

¥1,800.00

詢價(jià)

詢價(jià)

地高辛(Digoxin)

5" or 3" Digoxin

HPLC

¥600.00

¥800.00

¥1,200.00

熒光基團(tuán)(Fluorophores)

5" Cy3

HPLC

¥1,200.00

¥1,500.00

¥2,500.00

3" Cy3

HPLC

¥1,300.00

¥1,600.00

¥2,600.00

Internal Cy3

HPLC

¥1,400.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" Cy5

HPLC

¥1,100.00

¥1,500.00

¥2,500.00

3" Cy5

HPLC

¥1,000.00

¥1,800.00

¥2,600.00

Internal Cy5

HPLC

¥1,400.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" FAM

HPLC

¥280.00

¥320.00

¥450.00

3" FAM

HPLC

¥300.00

¥350.00

¥500.00

5" HEX

HPLC

¥450.00

¥600.00

¥900.00

5" TET

HPLC

¥450.00

¥600.00

¥900.00

5" 6-JOE

HPLC

¥550.00

¥650.00

¥900.00

3" 6-JOE

HPLC

¥550.00

¥700.00

¥1,000.00

5" Rox

HPLC

¥500.00

¥600.00

¥900.00

3" Rox

HPLC

¥550.00

¥700.00

¥1000.00

5" TAMRA

HPLC

¥450.00

¥600.00

¥850.00

3" TAMRA

HPLC

¥500.00

¥650.00

¥950.00

5" FITC

HPLC

¥300.00



3" FITC

HPLC

¥350.00



Internal TAMRA

HPLC

¥1000.00

詢價(jià)

詢價(jià)

淬滅基團(tuán)(Quenchers)

3" DABCYL

HPLC

¥750.00

¥900.00

¥1,200.00

3" BHQ 1

HPLC

¥600.00

¥800.00

¥1,100.00

3" BHQ 2

HPLC

¥600.00

¥800.00

¥1,100.00

電化學(xué)標(biāo)記(Electrochemicals)

Ferrocene

HPLC

¥550.00

¥700.00

¥1,000.00

其它

電詢


(六)雙標(biāo)記熒光探針

分類

標(biāo)記

純化方式

2 OD

5 OD

10 OD

3" TAMRA

5" FAM-3" TAMRA

2次HPLC純化

¥1,000.00

¥1,200.00

¥1,800.00

5" HEX-3" TAMRA

2次HPLC純化

¥1,400.00

¥1,600.00

¥2,000.00

5" TET-3" TAMRA

2次HPLC純化

¥1,400.00

¥1,600.00

¥2,000.00

5" JOE-3" TAMRA

2次HPLC純化

¥1,400.00

詢價(jià)

詢價(jià)

3" DABCYL

5" FAM-3" DABCYL

HPLC

¥1,000.00

¥1,200.00

¥1,800.00

5" HEX-3" DABCYL

HPLC

¥1,200.00

¥1,400.00

¥2,000.00

5" TET-3" DABCYL

HPLC

¥1,200.00

¥1,400.00

¥2,000.00

5" JOE-3" DABCYL

HPLC

¥1,300.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" TAMRA-3" DABCYL

HPLC

¥1,400.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" Cy5-3" DABCYL

HPLC

¥1,300.00

¥1,600.00

¥2,000.00

3" BHQ1

5" FAM-3" BHQ1

HPLC

¥1,000.00

¥1,200.00

¥1,450.00

5" HEX-3" BHQ1

HPLC

¥1,200.00

¥1,400.00

¥1,800.00

5" JOE-3" BHQ1

HPLC

¥1,100.00

詢價(jià)

詢價(jià)

BHQ2

5" ROX-3" BHQ2

HPLC

¥1,000.00

¥1,300.00

¥1,800.00

ECLIPSE

5" FAM-3" ECLIPSE

HPLC

¥1,000.00

¥1,200.00

¥1,800.00

5" HEX-3" ECLIPSE

HPLC

¥1,000.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" TET-3" ECLIPSE

HPLC

¥1,200.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" JOE-3" ECLIPSE

HPLC

¥1,100.00

詢價(jià)

詢價(jià)

5" TAMRA-3" ECLIPSE

HPLC

¥900.00

¥1,200.00

¥1,800.00

5" Rox-3" ECLIPSE

HPLC

¥900.00

¥1,200.00

¥1,800.00

其它

電詢


(七)、簡并堿基及代碼

簡并代碼MRWSYKVHDBN
代表堿基A/CA/GA/TC/GC/TG/TA/C/GA/C/TA/G/TC/G/TA/C/G/T


* 價(jià)格可能會隨市場有所波動(dòng),歡迎咨詢當(dāng)?shù)劁N售!

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